ЭКСКЛЮЗИО́ННАЯ ХРОМАТОГРА́ФИЯ

ЭКСКЛЮЗИО́ННАЯ ХРОМАТОГРА́ФИЯ (от англ. size-exclusion – ис­клю­че­ние по раз­ме­ру) (мо­ле­ку­ляр­но-си­то­вая хро­ма­то­гра­фия), ва­ри­ант жид­ко­ст­ной хро­ма­то­гра­фии, ос­но­ван­ный на разл. спо­соб­но­сти мо­ле­кул раз­но­го раз­ме­ра про­ни­кать в по­ры сор­бен­та, ко­то­рый слу­жит не­под­виж­ной фа­зой. В Э. х. ста­цио­нар­ная фа­за хи­ми­че­ски инерт­на и с раз­де­ляе­мы­ми ве­ще­ст­ва­ми прак­ти­че­ски не взаи­мо­дей­ст­ву­ет. Ва­ри­ан­ты Э. х. – гель-про­ни­каю­щая хро­ма­то­гра­фия (элю­ент – ор­га­нич. рас­тво­ри­тель) и гель-фильт­ра­ция (элю­ент – во­да). Э. х. впер­вые ис­поль­зо­ва­на в кон. 1950-х гг. для фрак­цио­ни­ро­ва­ния по­ли­ме­ров.

Хро­ма­то­гра­фич. ко­лон­ку за­пол­ня­ют сор­бен­том, час­ти­цы ко­то­ро­го име­ют по­ры оп­ре­де­лён­но­го диа­мет­ра. Бо­лее круп­ные мо­ле­ку­лы (боль­шей мо­ле­ку­ляр­ной мас­сы) про­хо­дят ме­ж­ду гра­ну­ла­ми, не про­ни­кая в по­ры сор­бен­та, по­это­му их объ­ём удер­жа­ния ра­вен объ­ё­му ко­лон­ки за вы­че­том объ­ё­ма сор­бен­та (т. н. сво­бод­ный объ­ём, обыч­но со­став­ляю­щий ок. 40% от об­ще­го объ­ё­ма ко­лон­ки V_к) и они элюи­ру­ют­ся из ко­лон­ки пер­вы­ми. Мо­ле­ку­лы сред­них раз­ме­ров час­тич­но вхо­дят в по­ры сор­бен­та, по­это­му их объ­ём удер­жа­ния не­сколь­ко вы­ше сво­бод­но­го объ­ё­ма и они вы­мы­ва­ют­ся позд­нее. Са­мые мел­кие мо­ле­ку­лы сво­бод­но про­ни­ка­ют в по­ры вме­сте с мо­ле­ку­ла­ми рас­тво­ри­те­ля, по­это­му их объ­ём удер­жа­ния в ко­лон­ке на­мно­го вы­ше сво­бод­но­го и при­бли­жа­ет­ся к V_к; они элюи­ру­ют­ся по­след­ни­ми. Объ­ём рас­тво­ра об­раз­ца для ана­ли­тич. раз­де­ле­ний не дол­жен пре­вы­шать 0,1% от V_к, для пре­па­ра­тив­ной хро­ма­то­гра­фии он дол­жен быть ок. 10% от V_к.

Для Э. х. при вы­со­ких дав­ле­ни­ях ко­лон­ки за­пол­ня­ют ус­той­чи­вы­ми к дав­ле­нию жё­ст­ки­ми сор­бен­та­ми (напр., по­ли­ме­так­ри­ла­том, си­ли­ка­ге­лем); мяг­кие ор­га­нич. сор­бен­ты (ага­ро­зу, дек­ст­ран, по­ли­ак­ри­ла­мид, се­фа­дек­сы, се­фа­ро­зу и др.) ис­поль­зу­ют для Э. х. низ­ко­го дав­ле­ния. Боль­шин­ст­во сор­бен­тов вы­пус­ка­ют­ся с разл. диа­мет­ра­ми пор, по­зво­ляю­щи­ми раз­де­лять ве­ще­ст­ва в ши­ро­ком диа­па­зо­не мо­ле­ку­ляр­ных масс – от 100 до 2 000 000. Э. х. ши­ро­ко ис­поль­зу­ет­ся для ис­сле­до­ва­ния, очи­ст­ки, вы­де­ле­ния по­ли­ме­ров (в т. ч. био­по­ли­ме­ров) и оп­ре­де­ле­ния их мо­ле­ку­ляр­но-мас­со­во­го рас­пре­де­ле­ния.