АФФИ́ННАЯ ХРОМАТОГРА́ФИЯ

АФФИ́ННАЯ ХРОМАТОГРА́ФИЯ (от лат. affinis – со­пре­дель­ный, со­при­ча­ст­ный) (био­спе­ци­фи­че­ская хро­ма­то­гра­фия), ме­тод ана­ли­за, раз­де­ле­ния, очи­ст­ки и вы­де­ле­ния био­ло­ги­че­ски ак­тив­ных ве­ществ (нук­леи­но­вых ки­слот, фер­мен­тов, ан­ти­тел, ре­цеп­тор­ных бел­ков, гор­мо­нов и др.), в ос­но­ве ко­то­ро­го ле­жит их био­спе­ци­фи­чес­кое взаи­мо­дей­ст­вие со ста­цио­нар­ным ли­ган­дом, им­мо­би­ли­зо­ван­ным на хро­ма­то­гра­фич. сор­бен­те; один из ва­ри­ан­тов ко­ло­ноч­ной жид­ко­ст­ной хро­ма­то­гра­фии. Наи­бо­лее ши­ро­ко А. х. при­ме­ня­ет­ся для вы­де­ле­ния и очи­ст­ки фер­мен­тов, где в ка­че­ст­ве ста­цио­нар­ных ли­ган­дов ис­поль­зу­ют ин­ги­би­то­ры фер­мен­тов, ко­фер­мен­ты, ана­ло­ги суб­стра­тов. А. х. сфор­ми­ро­ва­лась как ме­тод в кон. 1960-х гг. Рас­цвет А. х. свя­зан с бур­ным раз­ви­ти­ем био­тех­но­ло­гии и мо­ле­ку­ляр­ной био­ло­гии в 1970-х гг. Бы­ли реа­ли­зо­ва­ны пром. схе­мы вы­де­ле­ния ме­то­дом А. х. ря­да бел­ков – ин­су­ли­на, ин­тер­фе­ро­на, гор­мо­на рос­та, а так­же мн. фер­мен­тов – про­те­аз, ри­бо­нук­ле­аз, ли­паз, аци­лаз и др.

В А. х. для им­мо­би­ли­за­ции ста­цио­нар­но­го ли­ган­да (за счёт ко­ва­лент­но­го взаи­мо­дей­ст­вия, ре­же – фи­зич. ад­сорб­ции) ис­поль­зу­ют разл. сор­бен­ты – се­фа­ро­зу, цел­лю­ло­зу, по­ли­ак­ри­ла­мид, по­рис­тое стек­ло, си­ли­ка­гель и пр. Гл. тре­бо­ва­ния к сор­бен­ту: инерт­ность (т. е. вы­со­кая эф­фек­тив­ность раз­де­ле­ния обес­пе­чи­ва­ет­ся ис­клю­чи­тель­но за счёт био­спе­ци­фи­чес­ко­го взаи­мо­дей­ст­вия со ста­цио­нар­ным ли­ган­дом), ста­биль­ность в ус­ло­ви­ях экс­плуа­та­ции, воз­мож­ность кон­тро­ли­ру­е­мо­го при­сое­ди­не­ния ста­цио­нар­но­го ли­ган­да. Раз­де­ле­ние осу­ще­ст­в­ля­ют в хро­ма­то­гра­фич. ко­лон­ках. Це­ле­вой ком­по­нент де­сор­би­ру­ют пу­тём из­ме­не­ния ион­ной си­лы, рН или со­ста­ва элю­ен­та.

Су­ще­ст­ву­ет ряд раз­но­вид­но­стей ме­то­да. В ос­но­ве им­му­но­аф­фин­ной хро­ма­то­гра­фии ле­жит наи­бо­лее силь­ное и вы­со­ко­спе­ци­фи­чес­кое взаи­мо­дей­ст­вие ан­ти­те­ло – ан­ти­ген. В т. н. груп­пос­пе­ци­фи­че­ской (псев­до­аф­фин­ной) хро­ма­то­гра­фии в ка­че­ст­ве ли­ган­да, свя­зы­ваю­ще­го груп­пы род­ст­вен­ных фер­мен­тов, ис­поль­зу­ют не­ко­то­рые кра­си­те­ли (напр., ан­тра­хи­но­но­вые), им­мо­би­ли­зо­ван­ные ме­тал­ло­ком­плек­сы, гид­ро­фоб­ные груп­пы сор­бен­та. В этом слу­чае эф­фек­тив­ность раз­де­ле­ния дос­ти­га­ет­ся варь­и­ро­ва­ни­ем ус­ло­вий сорб­ции и де­сорб­ции, а так­же кон­ст­руи­ро­ва­ни­ем в вы­де­ляе­мых бел­ках спе­ци­фи­чес­ких уча­ст­ков взаи­мо­дей­ст­вия (напр., гек­са­ги­сти­ди­но­вых и хи­тин­свя­зы­ваю­щих фраг­мен­тов).