Гидрола́зы, класс ферментов, катализирующих реакции гидролиза. Гидролазы действуют на C–O, C–N, C–C и другие типы связи, в том числе фосфорноэфирные (P–O).

В соответствии с типом разрываемой связи различают несколько подклассов гидролаз. Например, эстеразы катализируют гидролиз сложноэфирных связей (в частности, липазы, фосфатазы, рибонуклеазы); гликозидазы (амилазы, лизоцим, нейраминидаза и др.) расщепляют гликозидные связи; пептидгидролазы (амино- и карбоксипептидазы, пепсин, трипсин, химотрипсин и др.) – пептидную связь; к группе гидролаз, действующих на фосфорноэфирные связи в нуклеозидтрифосфатах, относятся аденозинтрифосфатазы (например, ионный насос Na⁺, K⁺-АТФаза). Для проявления каталитической активности гидролаз кофакторы, как правило, не требуются.

Гидролазы играют важную роль не только как ферменты катаболизма основных биологических молекул (белков, пептидов, углеводов, липидов, нуклеиновых кислот и нуклеотидов). Они участвуют в регуляции важнейших биологических процессов, таких как активация проферментов и прогормонов (пептидазы), передаче гормонального сигнала в клетку (фосфолипазы, фосфодиэстеразы) и быстром изменении активности ряда регуляторных ферментов (фосфатазы).

Ряд лекарственных средств, применяемых в медицине, являются ингибиторами гидролаз: например, кардиотонические препараты (сердечные гликозиды) ингибируют Na⁺, K⁺-АТФазу сердца, что может увеличивать силу сокращений миокарда; спазмолитическое действие теофиллина и других метилксантинов обусловлено ингибированием фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов.